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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)?

更新時(shí)間:2022-04-13點(diǎn)擊次數(shù):1918
  原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)?
  1、組織塊培養(yǎng)法
 ?。?)接種后的前3天,觀察和移動(dòng)時(shí)注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動(dòng),否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。
 ?。?)加入的培養(yǎng)基不宜過(guò)多,以免浸泡的組織因輕微波動(dòng)而脫落。
  (3)細(xì)胞向外遷移時(shí),注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。
 ?。?)為促進(jìn)組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上,可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。

 

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)
 

 

  2、貼壁原代細(xì)胞
 ?。?)原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時(shí),會(huì)相互影響。這些細(xì)胞之間可以產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)活性物質(zhì),促進(jìn)細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)。如果接種細(xì)胞的密度過(guò)低,細(xì)胞間的促生長(zhǎng)作用就很小,細(xì)胞分散后很難適應(yīng)從體內(nèi)組織環(huán)境到獨(dú)立生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)高,會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)供給不足,代謝廢物迅速堆積,需要頻繁換液和通過(guò)。
 ?。?)適當(dāng)提高原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度,為培養(yǎng)細(xì)胞提供更多與體內(nèi)相似的細(xì)胞間相互作用,將大大提高原代培養(yǎng)細(xì)胞在體外的存活率。當(dāng)細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí),以較低的密度進(jìn)行接種和培養(yǎng)。
 ?。?)接種后的細(xì)胞盡快貼壁是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。接種后可將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3h~5h。待細(xì)胞貼壁后,可補(bǔ)充培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
  3、懸浮型原代細(xì)胞
 ?。?)原代細(xì)胞分離培養(yǎng)細(xì)胞必須保持懸浮狀態(tài)??梢酝ㄟ^(guò)增加培養(yǎng)基的粘度來(lái)懸浮細(xì)胞,例如在培養(yǎng)基中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。將培養(yǎng)基加入帶攪拌裝置的培養(yǎng)容器中,最少5ml,否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡,對(duì)細(xì)胞造成損傷。這種方式要注意攪拌速度不要太快,否則培養(yǎng)基會(huì)溢出,容易造成污染。如果培養(yǎng)基的量小于5ml,可以使用旋轉(zhuǎn)瓶進(jìn)行培養(yǎng)。更換懸浮培養(yǎng)細(xì)胞溶液時(shí),注意不要吸出細(xì)胞。
 ?。?)可懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞一般活力強(qiáng),體外分裂增殖快,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗大,換液時(shí)間間隔短。
 
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